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抗體有效期以及怎么儲存抗體

更新時間:2013-10-25點擊次數:3026


       抗體
由于性質和所使用的儲存條件不同,其存儲的“保質期”可能從幾周到幾年不等。每個抗體存儲的*條件是*的,然而我們還是可能總結抗體存儲的一些建議和一般準則。抗體的儲存時間取決于抗體固有的性質和儲存條件。抗體(尤其是酶)必須存放在適當的溫度和pH值范圍,為了維持蛋白質的活性,以及防止其聚集,經常保存在一定濃度的甘油,蔗糖,或類似的物質里面。表1 總結了抗體儲存的一般準則以及其他的注意事項。

  水, 4C 25-50%的甘油或乙二醇,-20C 凍結在-20 - 80C或在液氮 凍干
典型的保質期 1個月 1年內 多年 多年
抗體濃度 1-5 mg/ml 1-5 mg/ml 1-5 mg/ml 1-5 mg/ml
稀釋載體蛋白 BSA BSA BSA 沒有
消毒或抗菌的要求 沒有 沒有
抗氧化劑 2-ME, DTT 2-ME, DTT 沒有 沒有
熒光共軛 避光保存 避光保存 避光保存 避光保存
pH值 7.2-7.6 7.2-7.6    
金屬螯合劑 EDTA EDTA    
 
表1. 抗體貯存條件
儲存條件
實驗室設備
冰箱

不要用沒有霜凍的冰箱儲存需要零度以下保存的抗體。一般的家用冰箱是沒有霜凍的,而且它們可以通過反復的自動解凍來防止霜凍的形成。

儲存容器

帶有標記的抗體應該儲存在黑色瓶子里或者用錫箔紙蓋住瓶子。

溫度

一般來說,抗體存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會由于微生物的生長導致抗體退化和/或失活。抗體儲存液放在4℃環(huán)境中1天或者幾周內其活性不會受到明顯影響。另外,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲存于-20℃。通常我們?yōu)榱吮苊夥磸蛢鋈冢梢苑盅b抗體。我還可以加入抗微生物藥物(如*或硫柳汞)以避免微生物的生長。

抗凍劑:甘油和乙二醇

冰晶的形成能夠破壞蛋白質的結構,因此導致抗體失效。甘油或乙二醇等防凍劑可以防止水分子之間氫鍵的形成,加入到溶液中可以降低其的凝點。所以,溶液的凝點取決于抗凍劑的組成和濃度。具體的見表2。

  10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
甘油 -2 -5 -10 -16 -22 -34 -38 -19 -2 17
乙二醇 -4 -7 -15 -23 -34 -48 -51 -45 -29 -12
 
表2. 甘油和乙二醇在水中不同濃度(百分比%)的凝固點(攝氏度)

Note: 乙二醇是有毒性的,使用的時候一定要注意安全。

當儲存溫度低于抗體溶液真實的凝點的時候,抗體溶液就會凝固。但是,這個時候并不會形成冰晶,而是發(fā)生了玻璃化作用,其可以保持抗體結果完整性。

為了增加抗體的穩(wěn)定性,可以向抗體中加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲存于-20℃。通常為了避免反復凍融,可以分裝抗體。

因為普通甘油中含有微生物污染,所以使用無菌的甘油顯得尤為重要。

滅菌和殺菌劑

抗體制劑應通過使用0.45微米的過濾器過濾和消毒的,并且其必須進行無菌處理,以防止微生物污染。

抗微生物藥物,如終濃度為0.02-0.05%(W/V)的*(NaN3)或終濃度為0.01%(W/V)的硫柳汞可以抑制微生物的生長。

*對于大多數細胞和組織是有毒的。*溶液中抗體不應該被直接用在活細胞中,或在體內的研究。此外,*的干擾與大多數共軛反應。*可以通過凝膠過濾或透析清除。

蛋白酶抑制劑

蛋白酶抑制劑可以防止蛋白質水解。由于腹水和血清制試中都含有蛋白酶,所以儲存這類抗體和制劑的時候加入蛋白酶抑制劑尤為重要。。冷藏和/或加入蛋白酶抑制劑可用于防止這種降解。

抗體濃度

抗體濃度過低(<1毫克/毫升)更容易發(fā)生抗體的失活以及增加物理吸附造成的損失。因此,我們都要盡量的保持抗體(例如,1-5毫克/毫升)在儲存期間的濃度。通常的做法是添加“載體”蛋白質,如純化牛血清白蛋白(BSA)以防止這種降解和損失。

多克隆抗體

多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進程仍然非常緩慢。即使沒有甘油,只要你*凍融,抗體也可以存儲在-20℃幾年甚至幾十年。另一個重要的事情是,該抗體濃度應高于1毫克/毫升,因為稀的抗體容易失去活性而且容易造成物理吸附導致的損失。

單克隆抗體

單克隆抗體可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃保存。多年未見有失活、細菌滋生以及氧化。而凍干法(冷凍干燥,干燥或從冰凍狀態(tài))為一些冰凍以后不穩(wěn)定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數情況下,凍干的抗體是存放在-20℃。雖然冷凍干燥有許多優(yōu)點,它需要昂貴的設備和勞動力。

帶標記的抗體

帶標記的抗體一般儲存在黑色容器中或者用錫箔紙蓋住。

酶標記抗體

堿性磷酸酶和其他酶結合物對于冷凍特別敏感,一般應在4C短期存儲。

標記抗體長期保存是在終濃度為50%的甘油或乙二醇中于-20C保存。雖然某些酶結合物可在無保護劑的情況下于-20C儲存,但必須分裝,以防止反復凍融。

熒光標記抗體

熒光遇光容易分解,熒光標記的試劑(不只是抗體)必須避光保存,其應該存放在4C、避免讓其凝固。

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