17羥基孕酮試劑盒主要基于酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，通過競爭抑制法或雙抗體夾心法對樣本中的17羥基孕酮（17-OHP）進行定量測定。

　　競爭抑制法中，試劑盒將純化的17-OHP包被在微孔板上作為固相抗原。檢測時，樣本中的17-OHP與酶標記的17-OHP競爭結合微孔板上的有限抗體結合位點。樣本中17-OHP濃度越高，與酶標記17-OHP競爭結合的抗體就越少，最終形成的酶標復合物量越低。經洗滌去除未結合物質后，加入底物TMB顯色，酶催化反應使顏色深淺與樣本中17-OHP濃度成反比。通過酶標儀測定450nm波長下的吸光度值，結合標準曲線即可計算樣本濃度。

　　雙抗體夾心法則采用兩株針對17-OHP不同表位的特異性抗體。一株抗體包被微孔板作為捕獲抗體，另一株抗體標記HRP作為檢測抗體。檢測時，樣本中的17-OHP與捕獲抗體結合后，再與檢測抗體形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。經洗滌去除游離成分，加入底物顯色后，顏色深淺與樣本中17-OHP濃度成正比。通過標準曲線換算，可實現樣本濃度的定量分析。

　　兩種方法均需嚴格控制實驗條件，包括樣本采集時間、儲存溫度及試劑平衡時間。操作過程中需避免反復凍融樣本，防止溶血或高脂血癥樣本干擾檢測結果。試劑盒的靈敏度、特異性及線性范圍需通過方法學驗證，確保不同批次試劑的檢測一致性。